人腎損傷分子 1(Kim-1)檢測試劑盒(ELISA)說明書本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人腎損傷分子1(Kim-1)水平。用純化的人腎損傷分子1(Kim-1) 捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入人腎損傷分子1(Kim-1),再與HRP標記 的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化 下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人腎損傷分子1(Kim-1)呈正 相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人腎損傷分子1(Kim-1) 含量。
產(chǎn)品組成:
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試劑盒性能: 1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.95 以上。
2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應分別小于 10%和 15% 。
檢測范圍: 0.25 ng/mL - 8 ng/mL
靈敏度: 檢測濃度小于 0.1 ng/mL
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。
使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干
燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響 OD 值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應
試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備:
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。2021 版
操作步驟:
1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標
包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。
加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標試劑 100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
5. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍
干。
7.
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘.
8. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(
OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以
內(nèi)進行。
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